目的將兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶基因（COMT）克隆到原核表達(dá)載體進(jìn)行可溶性表達(dá)，制備純化COMT蛋白，為深入研究COMT的功能提供材料。方法運(yùn)用分子生物學(xué)方法構(gòu)建融合表達(dá)質(zhì)粒Pet22b^＋ -COMT。將Pet22b^＋ -COMT轉(zhuǎn)入E．coli BL21（DE3）表達(dá)菌株，利用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，并用親和色譜純化COMT。結(jié)果經(jīng)測序分析成功構(gòu)建了融合表達(dá)質(zhì)粒Pet22b^＋ -COMT。COMT基因在E．coli BL21（DE3）中表達(dá)相對(duì)分子質(zhì)量約為28000的蛋白質(zhì)，純化后，COMT蛋白的純度大于90％。結(jié)論COMT基因在原核中得到良好的表達(dá)，得到了純度較高的蛋白質(zhì)，為酶學(xué)活性研究奠定了基礎(chǔ)。
完成機(jī)構(gòu)：中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所,云南昆明650118
